ⅠNουκλεϊκό οξύiεισαγωγή
Το νουκλεϊκό οξύ χωρίζεται σε δεοξυριβονουκλεϊκό οξύ (DNA) και ριβονουκλεϊκό οξύ (RNA), μεταξύ των οποίων το RNA χωρίζεται σε ριβοσωμικό RNA (rRNA), αγγελιοφόρο RNA (mRNA) και RNA μεταφοράς (tRNA) ανάλογα με τις διαφορετικές λειτουργίες του.Το DNA συγκεντρώνεται κυρίως στον πυρήνα, τα μιτοχόνδρια και το χλωροφόρμιο, ενώ το RNA κατανέμεται κυρίως στο κυτταρόπλασμα.Ως υλική βάση της γονιδιακής έκφρασης, η εκχύλιση νουκλεϊκού οξέος παίζει εξαιρετικά σημαντικό ρόλο στην έρευνα της μοριακής βιολογίας και στην κλινική μοριακή διάγνωση.Η συγκέντρωση και η καθαρότητα της εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος θα επηρεάσει άμεσα την επακόλουθη PCR, τον προσδιορισμό της αλληλουχίας, την κατασκευή φορέα, την ενζυμική πέψη και άλλα πειράματα.
Ⅱ Μέθοδος εκχύλισης και καθαρισμού νουκλεϊκού οξέος
① Μέθοδος εκχύλισης φαινόλης/χλωροφορμίου
Η εκχύλιση με φαινόλη/χλωροφόρμιο είναι μια κλασική μέθοδος για την εκχύλιση DNA, η οποία χρησιμοποιεί κυρίως δύο διαφορετικούς οργανικούς διαλύτες για την επεξεργασία των δειγμάτων, διαλύοντας νουκλεϊκό οξύ με βάση το DNA στην υδατική φάση, λιπίδια στην οργανική φάση και πρωτεΐνες μεταξύ των δύο φάσεων.Αυτή η μέθοδος έχει τα πλεονεκτήματα του χαμηλού κόστους, της υψηλής καθαρότητας και του καλού αποτελέσματος.Τα μειονεκτήματα είναι η περίπλοκη λειτουργία και η μεγάλη διάρκεια.
② Μέθοδος Trizol
Η μέθοδος Trizol είναι μια κλασική μέθοδος εξαγωγής RNA.Η μέθοδος Trizol διαιρείται σε υδατική φάση και οργανική φάση μετά από φυγοκέντρηση με χλωροφόρμιο, στην οποία το RNA διαλύεται στην υδατική φάση, η υδατική φάση μεταφέρεται σε νέο σωλήνα EP, η καθίζηση επιτυγχάνεται μετά την προσθήκη ισοπροπανόλης και στη συνέχεια καθαρισμός με αιθανόλη.Αυτή η μέθοδος είναι κατάλληλη για εξαγωγή RNA από ζωικούς ιστούς, κύτταρα και βακτήρια.
③ Μέθοδος καθαρισμού φυγοκεντρικής στήλης
Η μέθοδος καθαρισμού στήλης φυγόκεντρου μπορεί να προσροφήσει DNA ειδικά μέσω ειδικών υλικών προσρόφησης μήτρας πυριτίου, ενώ το RNA και η πρωτεΐνη μπορούν να περάσουν ομαλά και στη συνέχεια να χρησιμοποιήσουν υψηλό αλάτι χαμηλό PH για να συνδυάσουν νουκλεϊκό οξύ, χαμηλού άλατος έκλουση υψηλής τιμής PH για διαχωρισμό και καθαρισμό νουκλεϊκού οξέος.Τα πλεονεκτήματα είναι η υψηλή συγκέντρωση καθαρισμού, η υψηλή σταθερότητα, η έλλειψη ανάγκης για οργανικό διαλύτη και το χαμηλό κόστος.Το μειονέκτημα είναι ότι πρέπει να φυγοκεντρηθεί βήμα προς βήμα, περισσότερα βήματα λειτουργίας.
④ Μέθοδος μαγνητικών σφαιριδίων
Η μέθοδος των μαγνητικών σφαιριδίων είναι ο διαχωρισμός του δείγματος του κυτταρικού ιστού μέσω του προϊόντος λύσης, η απελευθέρωση του νουκλεϊκού οξέος στο δείγμα και στη συνέχεια τα μόρια νουκλεϊκού οξέος απορροφώνται ειδικά στην επιφάνεια του μαγνητικού σφαιριδίου, ενώ ακαθαρσίες όπως πρωτεΐνες και σάκχαρα παραμένουν στο το υγρό.Μέσω των σταδίων διάσπασης κυτταρικού ιστού, δέσμευσης μαγνητικού σφαιριδίου με νουκλεϊκό οξύ, πλύσης νουκλεϊκού οξέος, έκλουσης νουκλεϊκού οξέος κ.λπ., τελικά λαμβάνεται καθαρό νουκλεϊκό οξύ.Τα πλεονεκτήματα είναι η απλή λειτουργία και η σύντομη χρήση, χωρίς την ανάγκη βηματικής φυγοκέντρησης.Έχει χαμηλές τεχνικές απαιτήσεις και μπορεί να πραγματοποιήσει αυτόματη και μαζική λειτουργία.Ο ειδικός συνδυασμός μαγνητικού σφαιριδίου και νουκλεϊκού οξέος κάνει το εκχυλισμένο νουκλεϊκό οξύ με υψηλή συγκέντρωση και καθαρότητα.Το μειονέκτημα είναι ότι η τρέχουσα τιμή αγοράς είναι σχετικά ακριβή.
⑤ Άλλες μέθοδοι
Εκτός από τις παραπάνω τέσσερις μεθόδους, υπάρχουν πυρόλυση βρασμού, μέθοδος συμπυκνωμένου αλατιού, μέθοδος ανιονικού απορρυπαντικού, μέθοδος υπερήχων και ενζυματική μέθοδος κ.λπ.
Ⅲ Τύπος εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος
Η Foregene διαθέτει την κορυφαία πλατφόρμα Direct PCR στον κόσμο, πλατφόρμα απομόνωσης RNA διπλής στήλης (μόνο για DNA + μόνο RNA).Τα κύρια προϊόντα περιλαμβάνουν κιτ απομόνωσης DNA/RNA, σειρές αντιδραστηρίων PCR και Direct PCR αντιδραστηρίων μοριακών εργαστηρίων.
① Ολική εξαγωγή RNA
Τα δείγματα ολικής εκχύλισης RNA περιλαμβάνουν αίμα, κύτταρα, ζωικούς ιστούς, φυτά, ιούς κ.λπ. Η υψηλή καθαρότητα και η υψηλή συγκέντρωση ολικού RNA μπορούν να ληφθούν μέσω εξαγωγής ολικού RNA, η οποία μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε RT-PCR, ανάλυση τσιπ, μετάφραση in vitro, μοριακή κλωνοποίηση, Dot Blot και άλλα πειράματα.
Σχετικά με το ForegeneΚιτ απομόνωσης RNA
Animal Total RNA Isolation Kit--Γρήγορη και αποτελεσματική εξαγωγή ολικού RNA υψηλής καθαρότητας και υψηλής ποιότητας από διάφορους ζωικούς ιστούς.
Κιτ απομόνωσης ολικού RNA κυττάρων--Εξαιρετικά καθαρισμένο και υψηλής ποιότητας ολικό RNA μπορεί να ληφθεί από διάφορα καλλιεργημένα κύτταρα σε 11 λεπτά.
Κιτ απομόνωσης ολικού RNA φυτού--Εξάγετε γρήγορα ολικό RNA υψηλής ποιότητας από φυτικά δείγματα με χαμηλή περιεκτικότητα σε πολυσακχαρίτες και πολυφαινόλες.
Κιτ απομόνωσης ιού RNA-- Απομονώστε γρήγορα και καθαρίστε το ιικό RNA από δείγματα όπως πλάσμα, ορός, σωματικά υγρά χωρίς κύτταρα και υπερκείμενα κυτταροκαλλιέργειας.
② Εξαγωγή γονιδιωματικού DNA
Τα δείγματα εξαγωγής γονιδιωματικού DNA περιλαμβάνουν χώμα, κόπρανα, αίμα, κύτταρα, ζωικούς ιστούς, φυτά, ιούς κ.λπ. Η εξαγωγή γονιδιωματικού DNA μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε ενζυμική πέψη, κατασκευή βιβλιοθήκης DNA, PCR, προετοιμασία αντισωμάτων, ανάλυση υβριδισμού Western blot, τσιπ γονιδίου, υψηλή -αλληλουχία απόδοσης και άλλα πειράματα.
Σχετικά με το ForegeneΚιτ απομόνωσης DNA
Κιτ απομόνωσης DNA ζωικού ιστού--Ταχεία εξαγωγή και καθαρισμός γονιδιωματικού DNA από πολλαπλές πηγές, όπως ζωικούς ιστούς, κύτταρα κ.λπ.
Blood DNA Midi Kit (1-5ml)--Γρήγορος καθαρισμός γονιδιωματικού DNA υψηλής ποιότητας από αντιπηκτικό αίμα (1-5ml).
Κιτ απομόνωσης στοματικού επιχρίσματος/κάρτας FTA DNA--Καθαρίστε γρήγορα γονιδιωματικό DNA υψηλής ποιότητας από δείγματα στοματικού επιχρίσματος/κάρτας FTA.
Κιτ απομόνωσης DNA φυτού--Γρήγορος καθαρισμός και λήψη γονιδιωματικού DNA υψηλής ποιότητας από φυτικά δείγματα (συμπεριλαμβανομένων πολυσακχαριτών και δειγμάτων φυτών πολυφαινόλης)
③ Εκχύλιση πλασμιδίου
Το πλασμίδιο είναι ένα είδος κυκλικού μικρού μορίου DNA στα κύτταρα, το οποίο είναι ένας κοινός φορέας για τον ανασυνδυασμό του DNA.Η μέθοδος εκχύλισης πλασμιδίου είναι να αφαιρεθεί το RNA, να διαχωριστεί το πλασμίδιο από το βακτηριακό γονιδιωματικό DNA και να αφαιρεθούν οι πρωτεΐνες και άλλες ακαθαρσίες για να ληφθεί σχετικά καθαρό πλασμίδιο.
General Plasmid Mini Kit--Γρήγορος καθαρισμός πλασμιδικού DNA υψηλής ποιότητας από μετασχηματισμένα βακτήρια για πειράματα ρουτίνας μοριακής βιολογίας, όπως μετασχηματισμός και πέψη ενζύμων
④ Άλλοι τύποι εκχύλισης, εξαγωγή miRNA κ.λπ.
Κιτ απομόνωσης miRNA ζώων--Γρήγορη και αποτελεσματική εξαγωγή μικρών θραυσμάτων RNA 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA από διάφορους ζωικούς ιστούς και κύτταρα
Ⅳ Απαιτήσεις για εκχύλιση νουκλεϊκού οξέος και αποτέλεσμα καθαρισμούs
① Για να εξασφαλιστεί η ακεραιότητα της πρωτογενούς δομής του νουκλεϊκού οξέος.
② Μειώστε την παρεμβολή πρωτεϊνών, σακχάρων, λιπιδίων και άλλων μακρομορίων
③ Δεν πρέπει να υπάρχει οργανικός διαλύτης ή υψηλή συγκέντρωση μεταλλικών ιόντων που να μπορούν να αναστείλουν το ένζυμο σε δείγματα νουκλεϊκού οξέος.
④ Η μόλυνση του RNA και άλλων νουκλεϊκών οξέων θα πρέπει να εξαλειφθεί κατά την εξαγωγή του DNA και αντίστροφα.
Ώρα δημοσίευσης: Νοε-24-2022
